Anticuerpo marcado

Qué es un anticuerpo marcado

El anticuerpo, por sí solo, se une a su antígeno con enorme especificidad, pero esa unión es invisible. Para poder detectarla y, sobre todo, cuantificarla, hace falta acoplarle una señal. El anticuerpo marcado —también llamado anticuerpo conjugado— es el resultado de esa unión: la molécula conserva intacta su capacidad de reconocimiento del antígeno (a través del fragmento Fab) y además porta una etiqueta detectable en el fragmento Fc o en otra posición de la molécula que no interfiera con la unión al epítopo.

Los tres tipos principales de marcaje dan nombre a familias enteras de técnicas. El marcaje con fluorocromos (fluoresceína, rodamina, ficoeritrina, entre otros) es el fundamento de la inmunofluorescencia directa e indirecta: el anticuerpo fluorescente se observa al microscopio de fluorescencia o se cuantifica en un citómetro de flujo. El marcaje con enzimas (peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina) es el principio del ELISA y de la inmunohistoquímica: la enzima cataliza una reacción que genera un producto coloreado, medible por espectrofotometría o visible al microscopio. Y el marcaje con isótopos radiactivos (¹²⁵I, ³H) fue el fundamento del radioinmunoanálisis (RIA) desarrollado por Rosalyn Yalow y Solomon Berson en la década de 1950, técnica que revolucionó la medición de hormonas y que le valió a Yalow el Nobel de Fisiología o Medicina en 1977. El RIA ha ido cediendo terreno al ELISA, más seguro y económico, pero el principio es el mismo: detectar el anticuerpo a través de su marca.

Preguntas frecuentes

¿El marcaje altera la capacidad del anticuerpo?

Si el conjugado está bien hecho, no. La molécula trazadora se acopla en posiciones del anticuerpo que no interfieren con el parátopo, de modo que la especificidad y la afinidad se conservan. Un exceso de moléculas de marcaje, sin embargo, puede alterar la conformación del anticuerpo y reducir su rendimiento.

¿Qué es un anticuerpo secundario marcado?

Es un anticuerpo anti-inmunoglobulina —producido en otra especie animal— que lleva el fluorocromo o la enzima y que se usa en técnicas indirectas: primero se deja que un anticuerpo primario sin marcar se una al antígeno, y luego el anticuerpo secundario marcado detecta al primario. La técnica indirecta amplifica la señal y es más versátil.

Referencias

1. Biblioteca Nacional de Medicina de Estados Unidos. Respuesta inmunitaria. MedlinePlus, enciclopedia médica en español.
2. Manual MSD, versión para profesionales. Pruebas inmunológicas para las enfermedades infecciosas.
3. Manual MSD, versión para profesionales. Componentes moleculares del sistema inmunitario.
4. Instituto Nacional del Cáncer (NCI). Definición de anticuerpo monoclonal. Diccionario de cáncer del NCI.