DICCIONARIO MÉDICO
Inmunofluorescencia indirecta
La inmunofluorescencia indirecta es la variante de la inmunofluorescencia que emplea dos anticuerpos. Un primer anticuerpo, sin marcar, reconoce el antígeno; un segundo anticuerpo fluorescente se une al primero y aporta la señal luminosa. Como sobre cada anticuerpo primario pueden fijarse varios secundarios, la técnica amplifica la fluorescencia y detecta cantidades más pequeñas. Es una de las dos modalidades de la inmunofluorescencia, y su nombre resume bien lo que ocurre. La fluorescencia no nace del encuentro entre el anticuerpo y su antígeno, sino de un paso posterior: un segundo anticuerpo, este sí marcado, que se dirige contra el primero. La luz llega, por tanto, de forma indirecta. El procedimiento se despliega en dos etapas. Primero se añade a la muestra el anticuerpo primario, que se ancla al antígeno de interés y se deja incubar. Tras un lavado, se incorpora el anticuerpo secundario, fabricado para reconocer no al antígeno, sino la porción constante del primario, y cargado con el fluorocromo. Un nuevo lavado retira lo sobrante y la preparación pasa al microscopio. El truco reside en esa segunda capa. Varios anticuerpos secundarios pueden posarse sobre un mismo primario, de manera que la señal se multiplica y aflora aunque el antígeno esté poco representado. Hay una ventaja añadida, y es práctica: un único anticuerpo secundario, dirigido contra las inmunoglobulinas de una especie, sirve para revelar muchísimos anticuerpos primarios distintos, lo que ahorra reactivos. El precio a pagar son más pasos, más tiempo y un riesgo algo mayor de reacciones cruzadas que generen falsos positivos. La indirecta brilla cuando lo que se busca son anticuerpos que circulan por la sangre. Al enfrentar el suero del paciente a un sustrato que porta antígenos conocidos, y revelar después con el secundario marcado, se pone de manifiesto si ese suero contiene anticuerpos frente a esas dianas. Es el principio de la detección de autoanticuerpos, entre ellos los anticuerpos antinucleares, y de buena parte de la serología de las enfermedades infecciosas. Fuera del diagnóstico, la amplificación que ofrece la convierte en una herramienta habitual de la investigación biomédica, donde se emplea para localizar proteínas presentes en cantidades mínimas dentro de células y tejidos. La inmunofluorescencia directa resuelve el marcaje con un solo anticuerpo fluorescente en un paso, más rápida y con menos ruido de fondo. La indirecta añade una segunda capa que amplifica la señal y gana sensibilidad, útil sobre todo para rastrear anticuerpos circulantes o antígenos escasos. Porque la fluorescencia no la produce el anticuerpo que reconoce el antígeno, sino un segundo anticuerpo que se une al primero. El marcaje llega en un rodeo, de ahí el adjetivo. En la variante directa, por el contrario, el propio anticuerpo específico lleva el fluorocromo. Por la amplificación. Sobre cada anticuerpo primario pueden acumularse varios secundarios marcados, y cada uno suma su aportación de luz. Así, una cantidad de antígeno que apenas daría señal en el método directo se vuelve visible. Esa es la razón de que se prefiera cuando la diana es escasa. El título indica hasta qué dilución del suero sigue detectándose fluorescencia. Se prepara el suero cada vez más diluido y se anota la última dilución en la que persiste la señal; un título de 1:320, por ejemplo, quiere decir que aún se observa con el suero diluido 320 veces. Cuanto mayor es esa cifra, más anticuerpo hay en la muestra. La interpretación de ese valor corresponde siempre al médico.Qué es la inmunofluorescencia indirecta
Fundamento de la técnica
Aplicaciones
Diferencias con la inmunofluorescencia directa
Preguntas frecuentes
¿Por qué se llama indirecta?
¿Por qué es más sensible que la directa?
¿Qué significa el título en un resultado de esta prueba?
Referencias
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