Examen directo

Qué es el examen directo

El nombre describe con precisión la maniobra: se examina la muestra de forma directa, tal como se obtiene del paciente o tras una dilución mínima en suero fisiológico, sin interponer reactivos ni colorantes entre el observador y el material biológico. En la literatura en inglés se emplea el término wet mount (preparación húmeda) o direct examination, según el contexto.

La técnica ocupa un lugar particular dentro del flujo de trabajo del laboratorio de microbiología. Mientras que las tinciones (Gram, Ziehl-Neelsen, giemsa) revelan detalles estructurales con mayor contraste, el examen directo ofrece algo que ninguna tinción proporciona: la posibilidad de observar al microorganismo vivo y en movimiento. La movilidad bacteriana, por ejemplo, es un dato con valor identificativo que solo puede apreciarse en una preparación sin fijar.

Preparación en fresco y gota pendiente

Las dos variantes más empleadas son la preparación en fresco simple y la técnica de gota pendiente.

En la preparación en fresco, se deposita una gota del material sobre un portaobjetos corriente, se cubre con un cubreobjetos y se observa con el condensador ligeramente descendido para aumentar el contraste. Si la muestra es sólida (una colonia aislada en cultivo, por ejemplo), se resuspende antes en una gota de suero fisiológico. El procedimiento completo apenas lleva unos minutos, lo cual constituye una de sus ventajas: el microbiólogo obtiene una primera orientación antes de que las tinciones y los cultivos estén listos.

La gota pendiente requiere un portaobjetos excavado, es decir, con una concavidad central. Se coloca una gota de la suspensión en el cubreobjetos, se invierte y se sella sobre la concavidad con vaselina. Al quedar la gota suspendida en el aire del hueco, la preparación tarda más en secarse y permite observaciones prolongadas. Antonie van Leeuwenhoek ya empleaba principios similares en el siglo XVII cuando describió por primera vez los «animálculos» del agua estancada con sus lentes simples, aunque el portaobjetos excavado como instrumento estandarizado se generalizó en los laboratorios del siglo XIX.

Aplicaciones del examen directo

Las muestras que con mayor frecuencia se someten a examen directo incluyen orina (en busca de leucocitos, eritrocitos, cristales o levaduras), exudados vaginales (para la identificación de Trichomonas vaginalis, un protozoo cuyo movimiento flagelar es característico), líquido cefalorraquídeo y secreciones respiratorias. En micología, la preparación con hidróxido de potasio (KOH) se considera también una forma de examen directo: el KOH disuelve la queratina de la muestra y deja visibles las hifas fúngicas sin necesidad de colorante.

El resultado de un examen directo nunca sustituye al del cultivo microbiológico, pero aporta una primera aproximación que puede orientar decisiones inmediatas.

Preguntas frecuentes

¿Por qué se llama examen «directo»?

Porque la muestra se observa sin manipulación previa significativa: no se fija ni se tiñe. El microscopista ve el material tal como es, de forma directa.

¿Cuál es la diferencia con una tinción de Gram?

La tinción de Gram fija y tiñe la muestra con cristal violeta y safranina, lo que mata a los microorganismos pero mejora el contraste y permite distinguir entre bacterias grampositivas y gramnegativas. El examen directo preserva la viabilidad y el movimiento, a costa de un contraste menor.

¿Qué se puede ver en un examen directo de orina?

Leucocitos, eritrocitos, células epiteliales, cristales (de oxalato cálcico, ácido úrico, fosfatos), levaduras y, en ocasiones, bacterias con morfología reconocible. La presencia y proporción de estos elementos aporta información clínica relevante al médico solicitante.

Referencias

1. Murray, P.R.; Rosenthal, K.S.; Pfaller, M.A. Medical Microbiology (9.ª ed.). Elsevier, 2020. Cap. 4: Laboratory Diagnosis of Bacterial Diseases.
2. MedlinePlus. Análisis de orina. Enciclopedia médica en español. Disponible en: medlineplus.gov
3. Universidad de Salamanca, Departamento de Microbiología. Métodos de estudio de los microorganismos: observación en fresco. Disponible en: aulacidta5.usal.es
4. Universidad Miguel Hernández. Docencia de Microbiología: observación en fresco. Disponible en: docenciamicrobiologia.umh.es