Virología

En función del virus que se busque y de cuál sea la cuestión planteada, se escogerá entre el diagnóstico directo (detección de un componente vírico) y el indirecto (detección de los anticuerpos dirigidos contra el virus).

Metodos de diagnóstico directo

Aislamiento de virus

A diferencia de lo que sucede con la mayoría de las bacterías, hongos y protozoos, los virus sólo pueden multiplicarse en el interior de las células vivas, no pudiendo hacerlo en un medio nutritivo carente de células. Los sistemas celulares utilizados para propagar los virus en el laboratorio son:

• Animales de experimentación: es una técnica poco empleada debido a diversas dificultades como el entrenamiento de los animales, la laboriosidad de la inoculación y el peligro de difusión del virus con las excretas de las animales.
• Embriones animales: Los más utilizados son los embriones de pollo
• Cutivos celulares artificiales: Se trata de multiplicar y mantener células in vitro. La células se obtienen de un fragmento de un órgano u embriones de pollo, por trituración y posterior disgregación con tripsina (enzima), lo que permite obtener células aisladas que se introducen en frascos con medos de cultivo líquidos adecuados (botellas o placas d petri). El medio de cultivo utilizado para los cultivos celulares es bastante complejo, e incluye aminoácidos, vitaminas, sales, glucosa y buffer de bicarbonato. Para un mejor crecimiento, se da la adición de una pequeña cantidad de suero sanguíneo, y también suele añadirse varios anitbióticos para impedir la contaminación bacteriana. También se añade un indicador de pH coloreados para evidenciar esta contaminación. 

Acción citopática

Lesión que causan algunos virus a las células in vitro. Pueden ser intensas y precoces, produciendo en 24 o 48 horas la muerte celular, acompañada de lisis fácilmente observable al inspeccionar los cultivos celulares con microscopio.

En las células infectadas por determinados virus pueden observarse cuerpos de inclusión. Los cuerpos de inclusión pueden visualizarse, después de la tinción de las células con hematoxilina-eosina, como masas con morfología más o menos característica y localización nuclear o citoplasmática típica, según los virus que los originan. Están constituidos por acúmulos del material vírico sintetizado depositados en zonas celulares alteradas.

Técnicas Inmunológicas

Pueden utilizarse tanto para la detección de antígenos (métodos directos), como  de anticuerpos (métodos indirectos).

En el caso de detección de antígenos, se utiliza un anticuerpo específico antiviral que se ha unido a una molécula marcada, que puede ser isotiocianato de fluoresceína (Inmunofluorecencia), un isótopo radioactivo, o una enzima: peroxidasa, fosfatasa alcalina, o biotina-avidina (EIA), para objetivar la reacción.

En el caso de detección de detección de anticuerpos virales (metodos que reconocen la respuesta inmune por parte del huésped), se utilizan anti-anticuerpos marcados. En los últimos años se han desarrollado nuevos métodos para la detección de anticuerpos específicos por técnicas inmunológicas; enzimoinmunoanalisis indirecto, inmunofluorescencia indirecta, test de aglutinación, western blot. 

Producción de anticuerpos in vitro

Este procedimiento revela la presencia de anticuerpos antivirales producidos in vitro a partir de los linfocitos B extraídos de sangre total, lo que indicaría que el sistema inmune del paciente ha sido estimulado por el virus.

Durante los últimos años han cobrado auge los métodos moleculares para buscar los ácidos nucleicos de los virus, en especial la amplificación génica y las técnicas derivadas de ella.

Mediante el microscopio electrónico es posible observar la morfología de los viriones presentes en muestras clínicas.

La limitación del método además del costo del microscopio, es que necesita de una alta concentración de viriones presentes en la muestra, por ello es poco sensible. Esto hace que sea una técnica poco utilizada.