Diagnóstico serológico

La respuesta inmune específica humana se divide de forma simplista en dos categorías:

• la respuesta inmune mediada por células, que es llevada a cabo por linfocitos de la clase T (timodependientes) y que incluye además la producción de activadores químicos que inducen a otras células a atacar y destruir a los patógenos (o a las células del huésped dañadas o infectadas por los patógenos)
• la respuesta inmune mediada por anticuerpos (AC), que se debe a proteínas específicas generadas por los linfocitos de la clase B (derivados de la médula ósea). Debido a que estas proteínas poseen una función inmunológica y a que en su estado activo están plegadas según una estructura globular, se denominan inmunoglobulinas.

Los anticuerpos son producidos contra una pequeña molécula específica, química y físicamente definida, que el huésped reconoce como extraña y que se denomina antígeno (AG) o determinante antigénico. Los antígenos pueden formar parte de la estructura del patógeno o ser sustancias producidas y liberadas por él.

Un microorganismo patógeno contiene y produce muchos antígenos diferentes que el huésped reconocerá como extraños, de modo que la infección con un agente provocará la aparición de varios anticuerpos específicos diferentes. Esta especificidad es la base de la mayoría de las técnicas inmunológicas para detección de Ag o Ac

Los anticuerpos se unen a la superficie de los patógenos y facilitan su ingestión por células fagocíticas (anticuerpos opsonizantes u opsoninas) o contribuyen a su destrucción por la acción lítica del complemento (anticuerpos fijadores de complemento). 

Las técnicas destinadas a la búsqueda de anticuerpos necesitan del tiempo necesario para que se produzca un aumento significativo del título de anticuerpos. Los antígenos en cambio, pueden ser detectados desde el comienzo de la enfermedad. Constituye una ventaja el que aún durante el tratamiento con antibióticos, los antígenos sean detectables.

En el laboratorio, el seguimiento de las reacciones AG/AC se hace casi siempre marcando a uno de los reaccionantes (con colorantes, con sustancias fluorescentes, con isótopos radioactivos, etc.). Posteriormente se interpreta el resultado de la reacción, bien por métodos espectrofotométricos (ELISA, ELFA ...), por medio de microscopía UV (IFI, ACIF ...) o por cualquier otra de las técnicas disponibles actualmente.

Si se pretende identificar un Ag, se utilizará un Ac específico marcado y si se quiere identificar un Ac específico, se utilizará y se marcará el Ag que induce su producción.

Dos son los procedimientos básicos para desarrollar este tipo de reacciones:

1. El método directo implica el marcaje del AC, para que, si se da la unión AG/AC, el complejo resultante lleve la marca del AC.
2. El método indirecto implica un tercer reactivo, un Anti-AC marcado, que si hay unión AG/AC, se une directamente al AC para dar un complejo AG/AC/Anti-AC que muestra la marca del Anti-AC.

Entre las enfermedades infecciosas diagnosticadas por exámenes serológicos están sífilis, rubéola, leptospirosis toxoplasmosis, mononucleosis infecciosa, etcétera.

Existen diferentes exámenes:

• Aglutinación: Se basan en la unión de antígenos particulados a los anticuerpos. Suele tratarse de pruebas muy sensibles pero con poca especificidad. Ejemplos de este tipo de pruebas es la aglutinación con rosa de Bengala empleada en el diagnóstico de la brucelosis. En el diagnóstico de cryptococosis, se usan partículas de látex recubiertas con anticuerpos antipolisacárido de la cápsula del Crytococcus neoformas, que provocan una aglutinación visible cuando está presente en el liquido cefalorraquideo (LCR) o en el suero del paciente. En casos de meningitis, se puede detectar en el LCR la presencia de antígenos de Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningiditis  y de Streptococcus beta hemolítico grupo B.
• Fijación del complemento: La fijación del complemento se basa en la capacidad del complemento para unirse a los complejos antígeno-anticuerpo. Metodológicamente, la prueba se desarrolla en dos fases, una primera que es una reacción antígeno anticuerpo en un medio líquido y una segunda consistente en la adición de complemento, una hemolisina dependiente de complemento y eritrocitos. Si se ha producido reacción antígeno-anticuerpo, es decir, si el suero analizado contenía anticuerpos frente al antígeno, el complemento queda fijado y no puede activar la hemólisis de los glóbulos rojos.
• Inmunofluorescencia: Las pruebas de inmunofluorescencia pueden utilzarse para detectar anticuerpos o para detectar la presencia de un patógeno. En ambos casos la reacción finaliza mediante la adición de un anticuerpo conjugado a una sustancia fluorescente, habitualmente fluoresceína. Se usa en la detección de virus respiratorios (influenza, parainfluenza, adenovirus, virus sincicial respiratorio), virus herpes, sarampión y parotiditis, así como en bacterias como Bordetella pertussis, Rickettsia rickettsia y Chlamydia trachomatis.
• Elisa (Enzimoinmunoanalisis): Las pruebas inmunoenzimáticas se basan en una reacción antígeno anticuerpo que tiene lugar sobre un soporte sólido (normalmente una microplaca de plástico) a la que se ha adsorbido un antígeno o un anticuerpo. La prueba puede desarrollarse en diferentes modalidades pero en todas ellas la reacción final se revela mediante un enzima que modifica un substrato que adquiere color. El color que se produce es proporcional a la cantidad de anticuerpo específico que se fija al antígeno. Se trata de pruebas muy sensibles y específicas. El método se utiliza en la detección de virus sincial respiratorio. Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, rotavirus, adenovirus, virus hepatitis, virus varicela-zóster, etcétera.
• Western Blot: Diversas proteínas de los Antigenos a investigar se fijan, por electroforesis, en una tira de Gel. El resto de la técnica se desarrolla como un enzimoinmunoensayo

Objetivos del diagnóstico serológico:

• Diagnóstico de la enfermedad actual
• Conocimiento del estado inmunitario de un individua previo a una vacunación
• Conocimiento del estado inmunitario de una población
• Diagnostico de infecciones por microorganismos que no se pueden cultivar
• Para diagnosticar infecciones en pacientes con tratamiento antibiótico
• Diagnostico retrospectivo (seroconversión)